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Manual de Uso y Mantenimiento de un Termociclador o Máquina de PCR

¿Quieres Aprender como Usar, limpiar y mantener optimo un ⭐ Termociclador ⭐ o Máquina de PCR? Entonces estas en el lugar adecuado, no solo eso, también aprenderás a Elegir el Mejor Termociclador en el 2018

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¿Qué es y cómo Funciona un termociclador?

Dentro de la rama de la biología existen muchos dispositivos que le dan grandes avances al hombre. Uno de estos es el termociclador, o también llamada máquina de PCR. La misma se encarga de trabajar mediante una reacción en cadena de polimerasa de ampliación de ADN.

En pocas palabras quiere decir que funcionan como un medio directo de resistencia eléctrica capaz de desplazarse a través de una placa con una temperatura que oscula de unos 4 a 96 grados centígrados. De esta manera ofrece una gran uniformidad en temperatura, para así obtener un excelente resultado en cada proceso biológico.

Este artefacto se considera uno de los elementos básicos utilizados en laboratorios para ofrecer con exactitud y homogeneidad de temperatura.

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Recuerda que los productos de segunda mano no son recomendables adquirirlos. Estos pueden tener alguna pieza defectuosa que puede llegar a interferir con el buen funcionamiento del equipo.

Modelos y Tipos de Termociclador

Existen varios tipos de termociclador:

Fabricantes y Marcas de máquinas de PCR o reciclador térmico de PCR

Existen infinidades marcas de PCR o reciclador térmico que son capaces de sorprenderte con sus funciones. Cada uno de los que te presentamos en nuestro sitio son los indicados y los que poseen un precio de descuento tan atractivo que te querrás llevar de una vez a tu casa. los PCR o recicladores térmicos son instrumentos bastante caros, pero si nos fijamos en comparativa a otros fabricantes, los que publicamos son la mejor opción cuando nos referimos a calidad y precio.

Manual de uso de Termociclador para PCR

Existe un manual de uso para poder aprovechar al máximo todas las funciones de un termociclador para PCR.

Utilidad y funcionamiento

El termociclador es el equipo perfecto para hacer PCR, lo que es conocido también como Polymerase Change Reaction) esta es una de las técnicas más importantes que suelen utilizar en materia biológica a nivel molecular. Su objetivo es uno y es el de producir numerosas copias de fragmento de un ADN. El termociclador más sencillo posee un bloque de resistencia eléctrica el cual se encarga de repartir mediante una placa una temperatura que va desde los 4ºC hasta los 96ºC, todo durante un tiempo que se puede programar.

Existen excepciones en equipos, los cuales cuentan con una resistencia eléctrica con tecnología Peltier, o más conocida por tener semiconductores que permiten homogeneidad en la temperatura.

Calibración Termocicladores

Calibrar los termocicladores es un proceso importante para cuidar los mismos. Es por ello que se deben tener claros todos los puntos de vista para calibrar uno de ellos. Entre estos se encuentran los puntos de vista biológicos moleculares, los cuales se centran en copiar una reacción de PCR a la vista de metrólogos.

Es por ello que la calibración se debe llevar a cabo por personal cualificado, es decir, ninguna persona común y corriente puede intentarlo. Recuerde que para ello se llevan a cabo años de estudios. Los puntos de vista se deben llevar a cabo también en condiciones ambientales definidas que permitan el proceso, como también las circunstancias. En el siguiente texto te vamos a explicar párrafo a párrafo la diferencia que hay en cada calibración para que así lleves a cabo la que más creas correcta e indicada para ti.

Calibración por imitación del proceso PCR

Si lo tomamos de la perspectiva de un biólogo molecular, esta es la mejor manera para poder calibrar cualquier termociclador siempre y cuando sea el proceso que imite el proceso PCR. El proceso correcto es poner tuvos en pozos de bloque, llenar la mezcla de reacción y colocar los sensores. Luego proceder a cerrar tubos y termocicladores con la tapa térmica para así poder desarrollar el protocolo PCR utilizado en el laboratorio.

Todo este proceso debe estar bajo una temperatura real en un tubo lleno de mezcla de reacción particular. Todo esto debe suceder durante el protocolo PCR llevado a cabo desde un instrumento particular.

Cada combinación de mezcla, tuvo o hasta el protocolo e instrumento de calibración deberán repetirse. Esto hace que la carga de trabajo sea mucho mayor. Por eso los resultados no se pueden ni si quiera comparar entre ellos. Ni si quiera a ningún tipo de norma ni especificación alguna establecida por el fabricante.

Hay que tener presente que esta forma de calibrar literalmente recopilaría muchas variables fuera de control. Por ello, agregar un componente grande de la incertidumbre, es lo mejor para terminar con incertidumbres que oscilen en el rango de más de 2 ºC. Ahora bien, cuando la incertidumbre es de unos 2 º C, y al mismo tiempo la medición de 96 º C, sucede que la temperatura del termociclador puede darse en cualquier rango entre los 94 º C y 98 º C.

Se debe tener presente también que la diferencia de temperatura podría tener repercusionessobre la inactivación de la Taq polimerasa. Por ello, el nivel de incertidumbre no es para nada agradable en la calibración del termociclador. Sin embargo, si se copia el proceso de la PCR puede llegar a parecer una opción tentadora.

Calibración representativa del proceso

Desde una perspectiva la mejor manera de calibrar un utensilio como el termociclador es mediante la medición representativa y estándar del proceso de PCR. El método permite la calibración de todos los PCR estándares. Se debe tener en cuenta la dinámica y su parte estática durante el proceso de PCR. Esto es importante ya que existen problemas que no se pueden saber a simple vista, o mejor dicho con el control estático de una PCR.

Las temperaturas próximas a la desnaturalización, elongación e hibridación deben ser evaluadas una a una. Los efectos que las mismas pueden tener pueden variar en función a la temperatura.

Calibración conforme a los estándares internacionales

Si se trabaja en el área de meteorología, esta podría ser el área perfecta para calibrar un termociclador. En materia de meteorólogo, una calibración es definida como operaciones necesarias bajo algunas condiciones en específico.

Durante este proceso la trazabilidad se encuentra garantizada al hacer uso de estándares de referencia y expresión de valores que se encargan de calibrar en unidades del SI. Sin embargo, también por aquella incertidumbre calculada del resultado de calibración. Además del hecho de que las mismas calibraciones son sólo hechas por ingenieros especializados en calibración que literalmente estén competentes y cualificados para ejercer dicha acción.

Cualquier laboratorio que haga pruebas PCR y que se encuentre acreditado y adiestrado a la norma ISO 170025 o ISO 15189 o fabricantes kit CE-IVD PCR certificados bajo norma ISO 13485 debe calibrar los termocicladores de manera trazable. Esto hace referencia a la norma ISO 18025.

Como saber si una calibración es totalmente segura

  • Calibración se debe medir con características térmicas que incluyan un resultado PCR. Entre ellos la exactitud, exceso o alcance, la velocidad fresco calor, tiempo de retención y uniformidad.
  • Se debe llevar a cabo un proceso dinámico en vez de un estático.
  • Es imprescindible realizar mediante varios canales para excluir efectos de tiempos entre los pozos.
  • De suma importancia tener las condiciones ambientales controladas.
  • El personal autorizado debe tener la experiencia necesaria para llevar a cabo estas acciones.

LIMPIEZA y mantenimiento preventivo

Es imprescindible mantener el termociclador en condiciones óptimas de trabajo. Para ello luego de desconectarlo de la corriente eléctrica se debe verificar que la misma no tenga una elevada temperatura. Luego de ello se debe elaborar las siguientes acciones:

  • Limpie la carcase en su parte externa suavemente con un paño de textura dócil. Este debe estar previamente humedecido con una solución jabonosa que contenga pH neutro si o sí. No se debe usar ceras o abrasivos de ninguna manera.
  • Limpie los pocillos de la placa con bastoncillos con un algodón previamente humedecido en isopropanol, o en su defecto también sirve el metanol.
  • Lave el área térmica y limpie con un paño suave con isopropanol. Sin embargo, cuando estos están muy sucios se deben utilizar bastoncillos humedecidos en soluciones con hipoclorito sódico al 1% como mucho. Luego de ello se completa el proceso de limpieza con el etanol al 95%.
  • Para limpiar el sistema de ventilación se debe asegurar que el mismo no tenga partículas adheridas. Tampoco debe existir un equipo que genere calor en un radio de al menos unos 30 cm.
  • El sistema de ventilación tiene una limpieza muy delicada. Todo el equipo debe estar desconectado de las fuentes eléctricas y esperar minutos para evitar que las cargas electroestáticas eviten una correcta limpieza. Con una brocha pequeña elimine obstrucciones existentes de polvo.
  • Luego de este proceso pase un paño previamente humedecido en isopropanol. Recuerda que estos procesos no deben incluir materiales que pueden causarle daño al dispositivo, como por ejemplo las ceras, los agentes abrasivos, soluciones ácidas o solventes.

MODO DE ACTUACIÓN ANTE UN ACCIDENTE COMÚN

Si en el peor de los casos se vierte líquidos en el bloque térmico, se debe evitar que los mismos sequen. Si esto pasa, el funcionamiento de los sensores se puede alterar y dar datos falsos a los procesadores de información internos.

¿Qué pasa dentro del termociclador?

Lo que sucede dentro del termociclador se divide en pasos. Estos son los siguientes:

  • El primer paso es la desnaturalización, la cual ocurre en el primer ciclo. De allí parte a los siguientes ciclos para separar hebras formadas. Mientras esto ocurre la temperatura oscila entre los 94 y 98 º C. este proceso dura al menos unos 10 segundos.
  • El segundo paso consiste en la alineación de los primers en la hebra del molde que se quiere amplificar. El paso tiene una duración de unos 20 segundos y su temperatura puede llegar a ser variable. Esto ocurre porque la misma depende más que todo de los primers usados en esta operación. Los primers son pequeñas secuencias de 20 nucleótidos en los cuales se usan pruebas con azúcares simples. En muchas ocasiones la glucosa hace parte de ello, la temperatura usada para este tipo de pruebas oscila entre los 55 y 65 º C, aunque algunas pueden llegar hasta los 72 º C. esta es la temperatura apta para trabajar con Taq polimerasa.
  • El tercer paso es la elongación de la doble hebra de 20 pares la cual ha sido creada en el paso anterior. El tiempo de elongación no debería ser más de un minuto por kilobase. Esto quiere decir que son unas mil bases del gen que se quiere amplificar. Es recomendado para las secuencias cortas unos 4 Kb máximo.

Luego de este paso es muy probable que se vuelva al primero de 98 º C durante unos 10 segundos y luego repetir el ciclo entre unas 30 y 45 veces más. Luego de estos 3 pasos se añade un paso más de calor, al menos unos 72 grados durante al menos 7 minutos. Esto es necesario para poder desanidar las hebras del ADN de primers y la polimerasa. Luego de ello se pasa a un paso frío que va entre una temperatura de 15 y 4 º C para así mantener la muestra en perfecto estado hasta el momento en el que se solicite.

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